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體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀
  • 更新日期:2025-04-28     瀏覽次數:150
    • 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀

      一、 儀器介紹

      實驗目的:

      本試驗檢測受試物是否引起培養的哺乳動物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

      實驗概述:

      在加入和不加入代謝活化系統的條件下,使培養的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。

      大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數目畸變。

      應用范圍

      應用于科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

      符合標準:

      GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體

      畸變試驗》

      二、試驗流程

      1)細胞培養

      選擇合適細胞系,在含血清培養基中培養至對數生長期。

      2)受試物處理

      設置多個濃度組(需包括細胞毒性評估,如50%生長抑制濃度)

      陽性對照

      陰性對照(溶劑對照)

      3.)代謝活化系統(S9混合液)

      模擬體內代謝,用于檢測需代謝激活的致突變物(如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9

      4.)采樣時間

      短期處理:1個細胞周期(通常24小時,含或不含S9

      長期處理:覆蓋多個細胞周期(如48小時)

      5)染色體制備

      秋水仙素(或秋水仙胺)處理:阻斷中期細胞。

      低滲處理(KCI溶液)使細胞膨脹。

      固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片,Giemsa染色。

      6)鏡檢分析

      顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相,記錄畸變類型和頻率。

      三、儀器與試劑

      關鍵儀器:

      培養箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡(配備油鏡和圖像分析系統)

      染色體自動掃描儀(可選)

      主要試劑:

      細胞培養基、胎牛血清。

      秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。

       

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